Les différence principale entre GFP et EGFP est que le La GFP (pour Green Fluorescent Protein) est une protéine qui présente une fluorescence verte brillante lorsqu'elle est exposée à la lumière bleue, tandis que l'EGFP (pour Enhanced Green Fluorescence Protein) présente une fluorescence plus forte que la GFP. En outre, une autre différence importante entre la GFP et l'EGFP est que la GFP est une protéine de type sauvage isolée de la méduse, Aequorea victoria. Mais, EGFP est une variante modifiée du type sauvage original.

La GFP et l'EGFP sont deux types de protéines qui servent de chromophores internes. Ils ne nécessitent pas d'enzymes/substrats accessoires, de cofacteur ou de produits géniques pour présenter sa couleur. Par conséquent, les deux sont utilisés comme rapporteur de l'expression génique en biologie moléculaire.

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Qu'est-ce que GFP

La GFP (protéine fluorescente verte) est une protéine qui brille en vert sous une lumière bleue ou UV. Il est naturellement présent dans la méduse Aequorea Victoria. La GFP est composée de 238 acides aminés. La taille de GFP est de 26,9 kDa. La GFP est un outil puissant en biologie moléculaire en raison de sa fluorescence intrinsèque sans aucune molécule accessoire. La fluorescence est due au réarrangement covalent des acides aminés contigus de la protéine. Après le repliement de la protéine, les atomes de la chaîne principale, Ser65, Tyr66 et Gly67 forment le chromophore planaire hautement conjugué p-hydroxybenzylidèneimidazolinone en présence d'O₂. Les études de structure cristalline révèlent que le tassement du chromophore dans le noyau de la structure en tonneau de la molécule le protège de l'extinction par l'oxygène paramagnétique, les dipôles d'eau ou l'isomérisation cis-trans. De plus, les interactions non covalentes du chromophore avec les molécules voisines améliorent ses propriétés spectrales.

Figure 1: Représentation du ruban de la GFP et du fluorophore

La GFP peut être introduite dans un organisme lors des modifications transgéniques. Il peut également être maintenu à travers les générations. L'inconvénient majeur de la GFP de type sauvage est l'efficacité réduite de la protéine dans l'imagerie cellulaire causée par le repliement à faible efficacité à des températures physiologiques telles que 37 ° C, laissant tomber le signal fluorescent. De plus, le taux de maturation de la GFP à l'intérieur de la cellule hôte est lent tout en ayant tendance à s'agréger. Deux pics d'excitation peuvent être observés du fait de la présence de deux formes différentes du chromophore. Cependant, l'ingénierie des protéines a résolu la plupart des problèmes en introduisant des variantes de la GFP de type sauvage.

Qu'est-ce que l'EGFP

L'EGFP (protéine de fluorescence verte améliorée) est une variante de la GFP de type sauvage avec une émission d'intensité plus élevée par rapport à la GFP. C'est l'une des premières et des plus importantes variantes de GFP. Les deux mutations, F64L et S65T, génèrent de l'EGFP avec une plus grande efficacité de repliement à 37 °C. Fait intéressant, EGFP a un seul pic d'excitation à ~ 490 nm en raison de la suppression du pic de 395 nm par S65T car il module l'état ionisé de Glu222 à proximité. D'autre part, le F64L augmente l'efficacité de pliage à 37 °C. Il est important de noter que la séquence de codons de l'EGFP est optimisée pour l'expression dans les cellules de mammifères.

Figure 2: Expression EGFP

Similitudes entre GFP et EGFP

Différence entre GFP et EGFP

Définition

GFP: Une protéine de type sauvage qui présente une fluorescence verte sous une lumière bleue ou UV et se produit naturellement dans la méduse, Aequorea Victoria

EGFP: Une variante de la GFP de type sauvage avec une émission d'intensité plus élevée par rapport à la GFP

représente

GFP: Protéine de fluorescence verte

EGFP: Protéine de fluorescence verte améliorée

Origine

GFP: Type sauvage

EGFP: Mutant

64^e Acide aminé

GFP: Phénylalanine

EGFP: Leucine

65^e Acide aminé

GFP: Sérine

EGFP: thréonine

Luminosité de la couleur

GFP: Vert clair

EGFP: Vert plus clair

Pics d'excitation

GFP: Deux pics (395 nm et 490 nm)

EGFP: Pic unique (490 nm)

Efficacité de pliage à 37 °C

GFP: Meugler

EGFP: Haute

Conclusion

La GFP est la protéine de type sauvage qui présente une fluorescence verte brillante lorsqu'elle est exposée à la lumière bleue ou UV. L'EGFP est une variante de la GFP qui présente une fluorescence de plus haute intensité par rapport à la GFP. Ainsi, la principale différence entre la GFP et l'EGFP est l'intensité de la fluorescence verte émise par chaque protéine.

Référence:

1. Arpino, James A.J., et al. "La structure cristalline de la protéine fluorescente verte améliorée à une résolution de 1,35 Å révèle des conformations alternatives pour Glu222." PLOS Medicine, Bibliothèque publique des sciences, journaux.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0047132.

Image de courtoisie:

1. "Gfp et fluorophore" Par Raymond Keller (Raymond Keller (discussion)), sous les auspices de Crystal Protein. - Travail personnel (domaine public) via Commons Wikimedia 2. «Fgams ppat egfp puncta» Par Zhao A, Tsechansky M, Swaminathan J, Cook L, Ellington AD, et al. (2013) Les enzymes biosynthétiques purines transfectées de manière transitoire forment des corps de stress. PLoS ONE 8(2): e56203. doi: 10.1371/journal.pone.0056203 (CC BY 3.0) via Commons Wikimedia