Les différence principale entre l'hybridation des colonies et des plaques est que le l'hybridation sur colonie est la méthode utilisée dans la sélection de colonies bactériennes avec les gènes souhaités, tandis que l'hybridation sur plaque est la méthode de sélection de phages avec les gènes souhaités. En outre, l'hybridation sur colonies peut être utilisée dans le criblage de bibliothèques à base de plasmides ou de cosmides, tandis que l'hybridation sur plaque peut être utilisée dans le criblage de bibliothèques de phages.

L'hybridation de colonies et de plages sont deux techniques utilisées dans le criblage de bibliothèques génomiques ou d'ADNc. Ils sont aussi appelés ascenseur de colonie et ascenseur de plaque respectivement.

Colonie, Hybridation de Colonie, Criblage de Bibliothèque, Plaque, Hybridation de Plaque

Qu'est-ce que l'hybridation de colonies

L'hybridation de colonies est une méthode de criblage utilisée dans la sélection de colonies bactériennes avec une séquence d'ADN souhaitée. On l'appelle aussi hybridation de buvardage de colonie, soulèvement de colonie ou placage de réplique. Il permet le criblage de colonies ensemencées à haute densité. La procédure originale d'hybridation de colonies a d'abord été développée par Grunstein et Hogness. Premièrement, les colonies bactériennes peuvent être transformées sur une membrane et les colonies bactériennes sont lysées, exposant les acides nucléiques. Ensuite, les acides nucléiques exposés se fixent sur la membrane en les dénaturant et s'hybrident avec les sondes radioactives.

Figure 1: Méthode d'hybridation des colonies

Une colonie est un groupe de bactéries développé à partir d'une seule cellule bactérienne par la reproduction asexuée. Par conséquent, toutes les cellules bactériennes d'une colonie particulière possèdent la même constitution génétique ainsi que le matériel génétique transformé. Généralement, les bactéries sont transformées à l'aide de vecteurs plasmidiques ou cosmidiques.

Qu'est-ce que l'hybridation de plaques

L'hybridation sur plaque est la méthode de criblage pour les phages recombinants. C'est une modification de l'hybridation des colonies par Benton et Devis en 1977. La méthode est aussi appelée ascenseur de plaque. La procédure d'hybridation sur plaque est similaire à la procédure d'hybridation sur colonie et les plaques sont soulevées en les mettant en contact avec une membrane de nitrocellulose. Les acides nucléiques sont ensuite exposés et fixés sur la membrane, s'hybridant avec les sondes souhaitées.

Figure 2: Plaques sur une plaque de gélose

Une plaque est une zone claire sur une plaque de gélose produite par un bactériophage particulier par la lyse de cellules bactériennes sur cette zone. En raison de la moindre quantité d'ADN transférée sur la membrane de nitrocellulose, l'hybridation sur plaque produit moins de signaux de fond.

Similitudes entre l'hybridation de colonies et de plaques

Différence entre l'hybridation de colonies et de plaques

Définition

L'hybridation de colonies fait référence à une méthode de sélection de colonies bactériennes avec les gènes souhaités, tandis que l'hybridation sur plages fait référence à une méthode de criblage utilisée dans l'identification de phages recombinants.

Développé par

L'hybridation sur colonie a été développée pour la première fois par Grunstein et Hogness, tandis que l'hybridation sur plaque a été développée pour la première fois par Benton et Devis en 1977.

Types de bibliothèques

L'hybridation de colonies implique l'identification de bibliothèques à base de plasmides ou de cosmides, tandis que l'hybridation sur plages implique l'identification de bibliothèques de phages.

Nombre d'ascenseurs

Les colonies peuvent être levées une seule fois tandis que les plaques peuvent être levées plusieurs fois.

Signaux de fond

Conclusion

L'hybridation de colonies est une méthode de criblage de colonies bactériennes dans les bibliothèques produites avec des vecteurs plasmidiques ou cosmidiques. D'autre part, l'hybridation sur plaque est une méthode de criblage des bactériophages dans les bibliothèques de phages. La principale différence entre l'hybridation sur colonie et sur plaque réside dans le type de bibliothèques criblées dans chaque méthode.

Référence:

1. Kaksonen, Anna. "Approches moléculaires pour l'analyse de la communauté microbienne." Lixiviation – BioMineWiki, 20 avril 2006, disponible ici2. Dale, JW et PJ Greenaway. "Identification des phages recombinants par hybridation sur plaque." Methods in Molecular Biology (Clifton, N.J.)., Bibliothèque nationale de médecine des États-Unis, disponible ici

Image de courtoisie:

1. «Blot Hybridization» de Kaksonen - http://wiki.biomine.skelleftea.se/biomine/molecular/index_22.htm (domaine public) via Commons Wikimedia 2. «M. plaque smegmatis »Par Wazzzup7up - Travail personnel (domaine public) via Commons Wikimedia