Un procédé de coloration différentielle est utilisé pour colorer les endospores. Le vert malachite est le colorant primaire qui colore à la fois les cellules végétatives et les endospores dans l'échantillon. Ensuite, l'utilisation de la chaleur aide à pénétrer la tache primaire jusqu'à l'endospore. Après décoloration, la contre-coloration safranine est utilisée pour colorer le fond.

Deux genres pathogènes connus sous le nom de Bacillus et Clostridium produisent des endospores métaboliquement inactives pour résister aux conditions environnementales défavorables. Étant donné que les endospores provoquent un certain nombre de maladies mortelles, leur identification est très importante dans les échantillons cliniques.

Domaines clés couverts

1. Que sont les endospores - Définition, faits 2. Qu'est-ce que la coloration Endospore – Techniques de coloration des endospores 3. Pourquoi la chaleur est-elle utilisée dans la coloration des endospores – Utilisation de la chaleur

Mots-clés: endospores, chaleur, vert malachite, pores, cellules végétatives

Que sont les endospores

Une endospore est une structure résistante produite par certains genres bactériens pathogènes tels que Bacillus et Clostridium afin de survivre dans des conditions environnementales défavorables. Ces conditions défavorables peuvent être la chaleur, la dessiccation, les radiations ou les produits chimiques. Le processus de production d'endospores à partir de cellules végétatives est appelé sporulation. Cela peut prendre 8 à 10 heures pour terminer le processus. Les endospores peuvent résider à l'intérieur de la cellule bactérienne ou peuvent exister sous forme de spores libres. La formation d'endospores est montrée dans Figure 1.

Figure 1: Formation d'endospores

Les endospores sont métaboliquement inactives ou dormantes. Ils contiennent une petite quantité de cytoplasme et d'ADN recouverts d'un revêtement extérieur protecteur. La paroi cellulaire est constituée d'acide dipicolinique, conférant des propriétés de résistance à la chaleur à l'endospore. Les endospores germent pour produire de nouveaux organismes lorsque les conditions environnementales deviennent favorables. Le traitement à la chaleur humide à 121 °C pendant 15 minutes peut détruire les endospores bactériennes.

Qu'est-ce que la coloration Endospore

La coloration des endospores est un processus différentiel de coloration dans lequel différentes structures de l'échantillon sont colorées de différentes couleurs. Il permet l'identification des endospores des cellules végétatives. Le procédé standard de coloration des endospores est la technique de Schaeffer-Dulton. La coloration principale de cette technique est le vert malachite et la contre-coloration est la safranine.

Technique de Schaeffer-Dulton – Procédure

1. Après avoir étalé sur une lame de microscope, laissez l'échantillon bactérien se saturer avec la solution de vert de malachite.2. Ensuite, chauffez doucement la lame pendant 3 à 5 minutes jusqu'à ce que le colorant commence à s'évaporer.3. Laisser refroidir la lame et la laver à l'eau pour la décoloration.4. Enfin, après contre-coloration, rincez la lame.5. Sécher à l'air la lame et l'observer au microscope.

Ici, les endospores sont colorées en vert avec du vert malachite et les cellules végétatives sont colorées en rose avec de la safranine. Les endospores colorées par la technique de Schaeffer-Dulton sont illustrées à la figure 2.

Figure 2: endospores (vert) et cellules végétatives (rose)

Une autre technique de coloration des endospores peut être identifiée, connue sous le nom de méthode de Doner. Les endospores seront colorées en rouge dans cette méthode.

Pourquoi la chaleur est-elle utilisée dans la coloration des endospores

La couche de kératine des endospores résiste aux taches. Par conséquent, le colorant primaire doit être forcé dans l'endospore. L'utilisation de la chaleur est d'améliorer la pénétration de la tache primaire dans l'endospore. La lame avec du vert malachite peut être chauffée jusqu'à 3-5 minutes. Le temps de chauffage est directement proportionnel aux quantités de colorants pénétrées dans la paroi des endospores. Des temps de chauffage plus longs créent des pores sur la paroi de l'endospore, facilitant la pénétration de plus de colorants.

Conclusion

Les endospores sont les cellules reproductrices de la plupart des bactéries pathogènes. Par conséquent, l'identification des endospores dans un échantillon est critique dans le diagnostic.

Référence:

1. "Endospore Stain - Comprendre les définitions, les techniques et les procédures." MicroscopeMaster, disponible ici.

Image de courtoisie:

1. «Formation Endospore» Par Farah, Sophia, Alex - Travail personnel (CC BY-SA 4.0) via Commons Wikimedia2. "Bacillus subtilis Spore" de Y tambe (téléchargeur original) - Travail personnel (CC BY-SA 3.0) via Commons Wikimedia