L'efficacité de la transfection peut être calculée en comptant le nombre de cellules transfectées sur le nombre total de cellules dans un échantillon particulier. Le nombre de cellules peut être compté par deux méthodes. La méthode la plus fréquemment utilisée consiste à utiliser des rapporteurs facilement exploitables. Ces rapporteurs peuvent être la protéine de fluorescence verte (GFP), la luciférase, la bêta-galactosidase, la phosphatase alcaline sécrétée (SEAP). La méthode la plus récente pour calculer l'efficacité de la transfection consiste à marquer les acides nucléiques, ce qui permet de suivre leur livraison intracellulaire. Certaines autres approches telles que le transfert de Western, l'immunocoloration et les tests fonctionnels peuvent également être utilisées pour calculer l'efficacité de la transfection. Étant donné que l'efficacité de la transfection dépend de plusieurs paramètres expérimentaux, la détermination de l'efficacité de la transfection est la clé pour déterminer l'influence de divers facteurs sur la transfection.

Domaines clés couverts

1. Quelles sont les méthodes utilisées pour calculer l'efficacité de la transfection – Systèmes de rapporteurs 2. Comment calculer l'efficacité de la transfection – Comptage des cellules

Termes clés: cytométrie en flux, GFP, étiquetage des acides nucléiques, système rapporteur, efficacité de la transfection

Quelles sont les méthodes utilisées pour calculer l'efficacité de la transfection

Différents types de méthodes sont utilisés pour calculer l'efficacité de la transfection.

1. Systèmes de rapporteurs

– Protéine de fluorescence verte (GFP) – La GFP se trouve naturellement dans les méduses. Il est utilisé à la fois pour l'analyse qualitative et quantitative des cellules transfectées par transfection simultanée du gène GFP avec le gène d'intérêt. L'analyse qualitative peut être effectuée sous un microscope à fluorescence. L'analyse quantitative peut être effectuée par cytométrie en flux. En plus de la GFP, la protéine de fluorescence rouge (RFP) et la protéine de fluorescence jaune (YFP) peuvent également être utilisées comme rapporteurs. Les colonies de E. coli exprimant des protéines fluorescentes sont montrées sur la figure 1.

Figure 1: Protéines fluorescentes

2. Étiquetage des acides nucléiques – Des plasmides marqués par fluorescence peuvent être utilisés dans la transfection. Ensuite, ils peuvent être comptés sous un microscope à fluorescence.

3. Western blot, immunocoloration et autres tests fonctionnels

Comment calculer l'efficacité de la transfection

Le nombre de cellules qui présentent le rapporteur et le nombre de cellules qui ne présentent pas le rapporteur peuvent être comptés au microscope ou par cytométrie en flux. Le pourcentage de cellules qui présentent le rapporteur donne l'efficacité de la transfection.

Figure 2: Efficacité de la transfection

Conclusion

L'efficacité de la transfection peut être calculée en déterminant le nombre de cellules qui présentent de l'ADN transfecté sur le nombre total de cellules dans l'échantillon. Le nombre de cellules peut être calculé au microscope ou par cytométrie en flux à l'aide d'un système rapporteur.

Référence:

1. « Mesurer l'efficacité de la transfection ». Mirus Bio LLC, disponible ici.

Image de courtoisie:

1. "E. coli exprimant des protéines fluorescentes »Par Erin Rod - Travail personnel, (CC BY-SA 4.0) via Commons Wikimedia