Le transfert de Southern est une technique utilisée pour la détection d'un fragment d'ADN spécifique dans un échantillon. La technique de transfert implique la séparation des fragments d'ADN en fonction de la taille via une électrophorèse sur gel, le transfert de l'échantillon d'ADN fractionné par taille sur une membrane filtrante, l'hybridation des fragments d'ADN spécifiques avec une sonde marquée et spécifique à la séquence et la détection des bandes marquées.

En plus de l'identification d'ADN spécifique dans un échantillon, la taille et l'abondance d'un type particulier d'ADN peuvent également être déterminées par Southern blot. Le processus impliqué dans le transfert de Southern est décrit dans cet article.

Domaines clés couverts

1. Qu'est-ce que le Southern Blot? - Définition, principe, applications 2. Comment fonctionne le Southern Blot – Processus de Southern Blot

Termes clés: ADN, électrophorèse sur gel, sonde d'hybridation, membrane en nylon, digestion par restriction, transfert de Southern

Qu'est-ce que le Southern Blot

Le transfert de Southern est une technique d'hybridation utilisée dans l'identification d'ADN spécifique dans un échantillon. La technique a été développée pour la première fois par Edward M. Southern en 1975. Ce processus identifie les séquences d'ADN, la taille et l'abondance d'une séquence d'ADN particulière dans un échantillon.

Une membrane de transfert de Southern est montrée dans Figure 1.

Figure 1: Membrane Southern Blot

Applications du Southern Blot

Les applications du transfert de Southern sont décrites ci-dessous.

1. Pour détecter un fragment d'ADN particulier
2. Pour isoler un fragment d'ADN particulier
3. Identifier les mutations et les réarrangements géniques
4. Dans les dosages RFLP (polymorphisme de longueur des fragments de restriction)
5. Identifier les maladies génétiques
6. Pour identifier les agents infectieux
7. Test de paternité
8. Dans les empreintes génétiques pour identifier les criminels

Comment fonctionne le Southern Blot

Le transfert de Southern implique la séparation de fragments d'ADN en fonction de leur taille via une électrophorèse sur gel, leur transfert dans une membrane, leur hybridation avec une sonde marquée spécifique à la séquence et la détection des bandes marquées. Les étapes du transfert de Southern sont décrites ci-dessous.

1. Digestion de l'ADN – L'échantillon d'ADN est digéré par des enzymes de restriction pour obtenir des fragments d'ADN, et ces fragments sont amplifiés par PCR.
2. Électrophorèse sur gel - Les fragments d'ADN sont fractionnés par taille par électrophorèse sur gel.
3. Dénaturation – Le gel avec l'ADN fractionné est trempé dans NaOH ou HCl pour dénaturer l'ADN double brin.
4. buvard – Les fragments d'ADN contenus dans le gel sont transférés dans une membrane en nylon chargée positivement par un processus appelé buvardage.
5. Cuisson et blocage – Le papier buvard avec des fragments d'ADN est cuit pour fixer l'ADN sur la membrane. Ensuite, les sites de liaison inoccupés sont saturés par traitement avec de la sérumalbumine bovine (BSA) ou de la caséine.
6. Hybridation avec des sondes marquées – La membrane liée à l'ADN est traitée avec une sonde marquée qui contient une séquence nucléotidique complémentaire au fragment d'ADN intéressé. Les sondes d'hybridation ont généralement une longueur de 100 à 500 pb et elles sont marquées avec des nucléotides radioactifs.
7. Visualisation par autoradiogramme – La membrane liée à la sonde est visualisée sous autoradiogramme pour obtenir les motifs du fragment d'ADN intéressé.

Figure 2: Southern Blot

L'ensemble du processus de Southern blot est illustré à la figure 2.

Conclusion

Le transfert de Southern est une technique d'hybridation utilisée dans l'identification de séquences d'ADN spécifiques à partir d'un échantillon. Dans ce processus, l'échantillon d'ADN est fractionné par des enzymes de restriction et le mélange est passé sur un gel. Ensuite, le motif de bandes dans le gel est transféré dans une membrane en nylon et hybridé avec une sonde marquée, ce qui permet la détection du fragment intéressé.

Référence:

1. « Transfert du Sud ». Thermo Fisher Scientific, disponible ici.

Image de courtoisie:

1. «Membrane de transfert sud» de Bojan Žunar - Travail personnel (CC BY-SA 4.0) via Commons Wikimedia2. « Figure 17 01 05 » par CNX OpenStax - (CC BY 4.0) via Commons Wikimedia