L'électrophorèse sur gel est une technique utilisée pour séparer des macromolécules telles que l'ADN, l'ARN et les protéines. Les molécules d'ADN et d'ARN sont séparées en fonction de leur taille, tandis que les protéines sont séparées en fonction de leur taille et de leur charge. L'électrophorèse sur gel d'agarose est la technique utilisée pour séparer à la fois l'ADN et l'ARN. De 100 pb à 25 kb, des fragments d'ADN peuvent être séparés par électrophorèse sur gel d'agarose. Généralement, les ADN sont des molécules chargées positivement car elles possèdent des charges négatives dans leurs groupes phosphate. Ainsi, l'ADN migre vers l'électrode positive lors de l'électrophorèse sur gel.

Domaines clés couverts

1. Qu'est-ce que l'électrophorèse sur gel - Définition, électrophorèse sur gel d'agarose, PAGE 2. Comment l'électrophorèse sur gel sépare-t-elle les fragments d'ADN – Principe de séparation de l'ADN

Termes clés: électrophorèse sur gel d'agarose, distance migrée, ADN, PAGE, pores, électrode positive, taille

Qu'est-ce que l'électrophorèse sur gel

L'électrophorèse sur gel est une technique utilisée pour séparer des fragments de macromolécules telles que l'ADN, l'ARN et les protéines en fonction de leur taille et de leur charge. L'ADN et l'ARN possèdent tous deux une charge négative égale dans toute la molécule en raison de la présence de groupes phosphate chargés négativement. Par conséquent, l'ADN et l'ARN migrent vers l'électrode positive sous un champ électrique. En outre, électrophorèse sur gel d'agarose est la technique utilisée pour séparer l'ADN et l'ARN en fonction de leur taille. La séparation des fragments d'ADN par électrophorèse sur gel est illustrée à la figure 1.

Figure 1: Fragments d'ADN séparés

La technique d'électrophorèse sur gel utilisée pour séparer les protéines est électrophorèse sur gel de polyacrylamide (PAGE). Les protéines utilisées dans cette technique sont séparées en fonction de leur taille et de leur charge. La PAGE peut également être utilisée pour séparer des fragments d'ADN présentant des différences au niveau des paires de bases, car le pouvoir de séparation de la PAGE est supérieur à celui de l'électrophorèse sur gel d'agarose.

Comment l'électrophorèse sur gel sépare-t-elle les fragments d'ADN

Au cours de l'électrophorèse sur gel d'agarose, les échantillons d'ADN sont mélangés avec le colorant de charge et sont chargés sur les puits du gel d'agarose. Le tampon de chargement contient des colorants de suivi qui visualisent le mouvement de l'échantillon d'ADN sur le gel. Ensuite, un champ électrique est appliqué aux deux extrémités du gel. L'échantillon d'ADN migre vers l'électrode positive. La vitesse de migration sur le champ électrique dépend de la taille du fragment d'ADN. Les molécules d'ADN avec un grand nombre de paires de bases migrent lentement tandis que les molécules avec moins de paires de bases migrent rapidement à travers le gel. Par conséquent, l'électrophorèse sur gel permet la séparation des fragments d'ADN en fonction de leur taille. Cela produit une série de fragments d'ADN avec des tailles dans l'ordre décroissant. La relation entre la distance de migration et la taille du fragment d'ADN est illustrée à la figure 2.

Figure 2: Relation entre la distance migrée et la taille du fragment d'ADN

Le gel d'agarose contient des pores de taille égale à travers lesquels les fragments d'ADN migrent. Par conséquent, les petits fragments d'ADN migrent rapidement à travers les pores, mais les gros fragments d'ADN mettent un certain temps à migrer à travers eux. Après avoir parcouru une distance considérable, le gel d'agarose est visualisé sous UV. Étant donné que le gel d'agarose est additionné d'une substance de coloration de l'ADN sous UV appelée bromure d'éthidium, des fragments d'ADN sont enchevêtrés avec la tache, permettant la visualisation. Pour la détermination de la taille du fragment d'ADN, les échantillons sont exécutés avec une échelle qui contient une série de fragments d'ADN de taille connue.

Conclusion

L'électrophorèse sur gel est une technique utilisée pour séparer des molécules d'ADN, d'ARN ou de protéines en fonction de leur taille et de leur charge. L'électrophorèse sur gel d'agarose est la technique largement utilisée pour la séparation de l'ADN en fonction de la taille de la molécule. Lors de la migration des molécules d'ADN à travers les pores du gel d'agarose, elles sont séparées en fonction de la taille.

Référence:

1. « Électrophorèse sur gel ». Khan Academy, disponible ici.

Image de courtoisie:

1. «DNA fragmendid etiidiumbromiidiga värvitud agaroosgeelis» Par Rainis Venta - Travail personnel (CC BY-SA 3.0) via Commons Wikimedia2. «Électrophorèse sur gel» de Mckenzielower - Travail personnel (CC BY-SA 4.0) via Commons Wikimedia