Les différence principale entre le buvardage sud-nord et ouest est que le Le transfert de Southern implique l'identification de l'ADN et le transfert de Northern implique l'identification de l'ARN, tandis que le transfert de Western implique l'identification de protéines.

Southern, Northern et Western sont trois techniques de transfert utilisées pour détecter une molécule d'ADN, d'ARN ou de protéine spécifique dans un échantillon. Pendant le transfert, les macromolécules sont transférées sur une membrane à partir du gel et amenées à se lier à un acide nucléique ou un anticorps spécifique qui facilite la détection.

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Qu'est-ce que le Southern Blot

Le Southern blot est la technique utilisée pour détecter une séquence d'ADN spécifique dans un mélange d'ADN. Les étapes de base d'un Southern blot sont les suivantes.

Électrophorèse – Il sépare l'échantillon d'ADN en bandes distinctes en fonction de la taille par électrophorèse sur gel.

Transfert – Lors du transfert, une membrane de nitrocellulose est mise en contact avec le gel et des bandes d'ADN se déplacent sur la membrane par capillarité.

Détection de séquences spécifiques – La séquence cible sur la membrane est hybridée avec la séquence oligonucléotidique spécifique et marquée appelée sonde d'hybridation. La sonde d'hybridation est une molécule d'ADN simple brin courte, d'une taille de 100 à 500 pb. La stringence, qui dépend de la température et de la concentration en sel du tampon d'hybridation, affecte l'hybridation. Une stringence élevée définie par la température élevée et une faible concentration en sel augmente la spécificité de l'hybridation tandis qu'une faible stringence définie par une température basse et une concentration en sel élevée diminue la spécificité.

Figure 1: Southern Blot

L'objectif principal du transfert de Southern est de détecter une séquence d'ADN spécifique dans un échantillon. La technique est utilisée pour les empreintes génétiques, les tests de paternité, l'identification des victimes et l'identification criminelle. Il aide également à l'identification de gènes spécifiques, dans le RFLP (polymorphisme de longueur des fragments de restriction), la mutation et l'identification de réarrangements géniques, de maladies génétiques et d'agents infectieux.

Qu'est-ce que le Northern Blot

Le Northern blot est la technique utilisée pour détecter un ARN spécifique dans un mélange d'ARN. Les étapes de base d'un Northern Blot sont les suivantes.

Électrophorèse – Il sépare l'échantillon d'ARN en fonction de la taille en bandes distinctes.

Transfert – Par capillarité, les bandes d'ARN du gel sont transférées sur la membrane.

Détection de séquences spécifiques – La séquence d'ARN cible est détectée par hybridation avec une sonde oligonucléotidique marquée constituée d'ADN.

Figure 2: Northern blot

Étant donné que le transfert de Northern peut identifier une séquence d'ARN spécifique dans un échantillon, il peut être utilisé dans les études d'expression génique. Il peut également aider au diagnostic de la maladie.

Qu'est-ce que le Western Blot

Le Western blot est une technique de transfert utilisée pour détecter une séquence d'acides aminés spécifique dans un mélange de protéines. Les étapes de base d'un Western Blot sont les suivantes.

Électrophorèse – Les protéines individuelles sont séparées en fonction de la taille en bandes par SDS PAGE.

Transfert – Les bandes de protéines dans le gel sont transférées sur une membrane par buvardage.

Détection de protéines spécifiques – La membrane avec des protéines séparées est incubée avec un anticorps primaire qui ne se lie qu'à la protéine spécifique. Un anticorps secondaire, qui est marqué avec une enzyme telle que la peroxydase de raifort (HRP) ou la phosphatase alcaline, est utilisé pour détecter l'anticorps primaire. Lorsqu'elle est incubée avec le substrat, l'action enzymatique visualise la liaison des anticorps à une région spécifique de la membrane.

Figure 3: Western blot

Le Western blot est également appelé protein blot ou immunoblot. Il peut identifier le nombre de protéines dans un échantillon, la présence de bactéries et de virus dans le sérum et la présence d'anticorps anti-VIH dans le sérum. Il peut également détecter des protéines défectueuses. De plus, le western blot est le test définitif pour l'hépatite B, la maladie de Creutzfeldt-Jacob, la maladie de Lyme et l'herpès.

Similitudes entre le buvardage sud-nord et ouest

Différence entre le buvardage sud-nord et ouest

Définition

Le transfert de Southern fait référence à une procédure d'identification de séquences spécifiques d'ADN, tandis que le transfert de Northern fait référence à une adaptation de la procédure de transfert de Southern utilisée pour détecter des séquences spécifiques d'ARN par hybridation avec de l'ADN complémentaire et le transfert de Western fait référence à une procédure de transfert utilisée pour identifier des acides aminés spécifiques. -séquences acides dans les protéines.

Développé par

Le transfert de Southern a été développé par Edward M. Southern en 1975. Le transfert de Northern a été développé par Alwine et ses collègues en 1979, et le transfert de Western a été développé par le groupe de George Stark à l'Université de Stanford en 1979.

Molécule détectée

Le transfert de Southern détecte des séquences d'ADN spécifiques, le transfert de Northern détecte des séquences d'ARN spécifiques, tandis que le transfert de Western détecte des protéines spécifiques.

Électrophorèse sur gel

Le transfert de Southern implique une électrophorèse sur gel d'agarose et le transfert de Northern implique la dénaturation du gel d'agarose au formaldéhyde, tandis que le transfert de Western implique la SDS PAGE.

Méthode de buvardage

Le Southern et le Northern Blot impliquent tous deux un transfert capillaire, tandis que le Western blot implique un transfert électrique.

Sondes

Le transfert de Southern utilise des sondes d'ADN tandis que le transfert de Northern utilise des sondes d'ADNc et le transfert de Western utilise des anticorps primaires et secondaires.

Application

Le transfert de Southern est utilisé pour identifier des séquences de gènes spécifiques et dans les empreintes génétiques. Le transfert de Northern est utilisé dans l'analyse de l'expression génique, et le transfert de Western est utilisé dans le diagnostic de la maladie.

Conclusion

Le transfert de Southern identifie une séquence d'ADN spécifique, tandis que le transfert de Northern identifie une séquence d'ARN spécifique et le transfert de Western identifie une séquence de protéine spécifique dans un échantillon. Par conséquent, la principale différence entre les trois techniques de transfert est le type de macromolécule qu'elles détectent.

Référence:

1. "Southern Blot: Principe, Procédure et Application -." NOTES DE BIOLOGIE EN LIGNE, 4 décembre 2017, disponibles ici2. Kochunni, Deena T et Jazir Haneef. "Northern Blot: Principe, Procédure et Applications." Examens de biologie 4 U, disponibles ici3. "Technique de Western Blot: Principe, Procédure et Application -." NOTES DE BIOLOGIE EN LIGNE, 4 décembre 2017, disponible ici

Image de courtoisie:

1. "Figure 17 01 05" par CNX OpenStax - (CC BY 4.0) via Commons Wikimedia2. « Diagramme de transfert du nord » de Ilewieszoośmiornicach - Travail personnel (CC BY-SA 4.0) via Commons Wikimedia 3. « Western Blotting » de Cawang - Travail personnel (CC0) via Commons Wikimedia